技术服务

羊驼免疫纳米抗体定制

羊驼免疫服务

羊驼为纳米抗体开发免疫常用物种,具有体型小巧,易于操作等优点。由于早期纳米抗体的发现及研究集中国外,多数免疫及药物研发都使用羊驼作为纳米抗体开发的选择,同时羊驼相比我国资源丰富的骆驼,其主要来源自国外进口及国内繁育。古格尔生物自主搭建了羊驼养殖免疫基地,优选国外进口适龄健康羊驼,可提供相关免疫及纳米抗体开发服务。


纳米抗体特点


单域抗体,又称纳米抗体(nanobody),是一种发现于羊驼、骆驼等骆驼科动物中含有的特殊结构的抗体形式。该抗体与传统正常抗体的重轻链匹配不同,只由重链组成,其恒定区中的CH1区缺失,导致其无法与传统正常抗体中的轻链配对,只包含一个重链可变区(VHH)和两个常规的CH2与CH3。VHH可单独表达,其结构稳定性并能保持结合活性,分子量约为12-15 kD,是目前已知的可结合目标抗原的最小抗体单位。

纳米抗体与正常抗体结构比较图示



① 分子量小12KD,仅为正常抗体的1/10,可穿透血脑屏障

② 氨基酸序列与人同源性达80%以上,抗原决定簇少,免疫原性低

③ 框架区Fr2中较正常抗体由疏水性氨基酸突变为亲水性氨基酸,可溶性高,不易聚集

④ 稳定性好,耐高温、强酸、强碱,应用场景广阔

⑤ CDR3区较正常抗体更长,特异性强,亲和力高,能识别独特结构的隐秘表位

⑥ 可进行原核表达,操作简单,成本低廉


文库构建案例展示

驼源PBMC的RNA提取


R1轮PCR——分离VHH重链抗体与正常重链抗体


R2轮PCR——扩展VHH重链抗体片段


驼源纳米抗体文库阳性率100%


文库序列分析

文库构建完成后,随机挑选单克隆测序,对文库中纳米抗体的多样性进行分析:



筛选案例


技术服务流程

羊驼免疫纳米抗体筛选服务流程

服务流程

内容

周期

交付

免疫方案制定

沟通靶点基本信息

确定免疫物种

确定免疫方案

1.免疫血清

2.PBMC

3.免疫文库

4.筛选抗体序列

5.实验报告

mRNA制备

基因合成

制备mRNA免疫源

2-3周

动物免疫

检测血清效价

7-8周

文库构建

分离PBMC

扩增抗体基因

构建文库质粒

生产抗体文库

2周

抗体筛选

文库淘选

ELSIA检测阳性克隆

测序分析序列

2周