技术服务

纳米抗体人源化

抗体人源化简介

非人源抗体序列进入人体内,易于引起免疫排斥,使得抗体被机体迅速消除以及可能引起安全性副作用,影响功效。降低这一的方案便是对抗体序列进行人源化替换,将原始抗体可变区中的CDR区(抗原结合区)提取出来以保持结合 活性,抗体可变区框架结构(framework)用天然人源的抗体序列进行替代,可以将抗体的整体人源化序列程度提高到90%以上,可在保持原始抗体亲和力的同时极大降低其可能的免疫原性。



抗体人源化过程图示


筛选得到的抗体分子,虽然在特异结合、功能、表达等项目表现优异,但往往在下游开发阶段出现活性降低、结合能力消失、稳定性、结构改变等问题,导致纯化困难和有效性下降,这是由于抗体在生产过程中存在细胞内翻译后修饰(PTM),抗体蛋白翻译后序列中的特征序列可被识别,进而参与生化反应。PTM发生在抗体的可变区,尤其是CDR区中关键氨基酸产生化学修饰和反应,可导致CDR区结构发生改变,抗原结合能力下降或无法结合;同时过多的PTM修饰导致抗体整体结构变化,引起结构稳定性改变和产生免疫原性。

                  

PTM类型

影响

糖基化

活性丢失,唾液酸糖基化影响PK

氧化

活性丢失,聚集

脱氨基

活性丢失,聚集,影响工艺开发

异构化

性丢失,聚集

二硫键

活性丢失,聚集

ASP水解

抗体片段化,影响稳定性

PTM位点及影响图示


因而在抗体发现上游阶段,提前分析抗体序列中的PTM位点,并对可能产生影响的位点进行改造,可为后期开发排除隐患,减少候选分子淘汰率。PTM的优化主要是针对CDR区中的位点进行风险分析,及对关键位点氨基酸进行突变更换,在保证功能的前提下将PTM位点去除。


技术服务流程

抗体人源化服务流程

服务流程

内容

周期

交付

确定优化模板

分析待优化抗体序列框架,与数据库比对选择最优改造模板

1. 5株最优人源化抗体蛋白1mg

2. 实验报告

3. 抗体序列

4. 抗体序列质粒

分析序列

确定表达组合

同源建模

关键位点回复突变

PTM分析

人源化抗体生产

基因合成

质粒构建

转染表达

3周

亲和力检测

SPR/BLI等仪器检测

比对亲本亲和力

1周