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抗体人源化简介
非人源抗体序列进入人体内,易于引起免疫排斥,使得抗体被机体迅速消除以及可能引起安全性副作用,影响功效。降低这一的方案便是对抗体序列进行人源化替换,将原始抗体可变区中的CDR区(抗原结合区)提取出来以保持结合 活性,抗体可变区框架结构(framework)用天然人源的抗体序列进行替代,可以将抗体的整体人源化序列程度提高到90%以上,可在保持原始抗体亲和力的同时极大降低其可能的免疫原性。
抗体人源化过程图示
筛选得到的抗体分子,虽然在特异结合、功能、表达等项目表现优异,但往往在下游开发阶段出现活性降低、结合能力消失、稳定性、结构改变等问题,导致纯化困难和有效性下降,这是由于抗体在生产过程中存在细胞内翻译后修饰(PTM),抗体蛋白翻译后序列中的特征序列可被识别,进而参与生化反应。PTM发生在抗体的可变区,尤其是CDR区中关键氨基酸产生化学修饰和反应,可导致CDR区结构发生改变,抗原结合能力下降或无法结合;同时过多的PTM修饰导致抗体整体结构变化,引起结构稳定性改变和产生免疫原性。
PTM类型 | 影响 |
糖基化 | 活性丢失,唾液酸糖基化影响PK |
氧化 | 活性丢失,聚集 |
脱氨基 | 活性丢失,聚集,影响工艺开发 |
异构化 | 性丢失,聚集 |
二硫键 | 活性丢失,聚集 |
ASP水解 | 抗体片段化,影响稳定性 |
PTM位点及影响图示
因而在抗体发现上游阶段,提前分析抗体序列中的PTM位点,并对可能产生影响的位点进行改造,可为后期开发排除隐患,减少候选分子淘汰率。PTM的优化主要是针对CDR区中的位点进行风险分析,及对关键位点氨基酸进行突变更换,在保证功能的前提下将PTM位点去除。
技术服务流程
抗体人源化服务流程 | |||
服务流程 | 内容 | 周期 | 交付 |
确定优化模板 | 分析待优化抗体序列框架,与数据库比对选择最优改造模板 | — | 1. 5株最优人源化抗体蛋白1mg 2. 实验报告 3. 抗体序列 4. 抗体序列质粒 |
分析序列 确定表达组合 | 同源建模 关键位点回复突变 PTM分析 | — | |
人源化抗体生产 | 基因合成 质粒构建 转染表达 | 3周 | |
亲和力检测 | SPR/BLI等仪器检测 比对亲本亲和力 | 1周 |
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